冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便,且不经过酒精、二甲苯等有机溶剂及高温环境,可较好的保存脂类、酶类等易于溶解有机溶剂的物质。也可更好地满足切片厚度的要求。新鲜组织取材并OCT包埋/固定组织经过15%-30%梯度蔗糖溶液脱水后取材并OCT包埋,然后按指定要求切片。低温存放完成的切片。速冻是冰冻切片为关键的环境,只有速冻才能减少组织内的冰晶。
切片要求:
客户提供OCT包埋块、冰冻组织或固定组织。在满足客户要求的前提下,根据不同的组织类别和后续需要做的实验项目选择合适的厚度。常规切片厚度为8-12微米。
实验流程:
新鲜组织:取材-OCT包埋-冰冻切片。
固定组织:取材-固定-蔗糖脱水-OCT包埋-冰冻切片。
样本要求及运输条件:
1、新鲜组织需干冰保存运输,固定组织用固定液保存常温运输,如有自发光应避光运输。
2、特殊结构或部位,送样时应附图谱或说明,确保能快速准确地切到该区域。
3、标本瓶上编号简洁明了清晰。需使用合适的容器存放组织,容器不宜过小,否则会导致组织挤压变形,不能漏液。不能用玻璃瓶,易碎。
主要应用:
1、切片后常规的HE、IHC、IF染色等。
2、某些酶的染色,如ATP酶、β-半乳糖苷酶等。
3、组织中的脂肪和脂类物质,常见于某些病例如脂肪瘤、脂肪肝等。切片后,经过油红O染色辅助判断。
4、神经病理学技术中,要求一定厚度的脑组织切片等。
5、对某些物质所进行的免疫荧光的研究,比如新鲜组织自发荧光,切片后观察。
注意事项:
单纯切片的,每个OCT包埋块建议多切几张备用,如果是需要做多种染色或组化荧光建议连续切片一次性将需要做的染色片子预留出来备用,防止浪费组织,默认做防脱切片。