石蜡切片是组织学常规制片技术中为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织形态变化的主要方法。而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片前,需将切片机上有关螺丝拧紧,并调整好切片刀的角度。切片的步为粗切,粗切的厚度大约为15-30μm左右,质地较硬或组织较小的组织的粗切厚度应更薄,甚至不能粗切。粗切至组织完全暴露后,再进行细切,细切至组织块表面均匀一致,无白点后,将切出来的蜡片放入温水中。切片时要求用力均匀,柔和,摇速不宜过快或过慢。切片厚度一般为3-5μm。切片的要求是完整、薄、均匀。切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平,载玻片将组织捞起,60℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
实验流程:
客户取材-固定-专业再取材-脱水-透明-浸蜡-包埋-切片。
样本要求及运输条件:
1、提供固定完全的组织样本。组织离体后,选择合适的固定液和容器立即固定,固定液的量建议大于组织体积的10-15倍,固定时间建议24-48h,大标本固定12h,再切开固定。固定完全后尽快送检。标本常温(24℃左右)或冷藏(4℃)固定,切勿冷冻结冰,固定样本常温运输送样。
2、提供编号清晰的蜡块或蜡头。
注意事项:
单纯切片的,每个蜡块建议多切几张备用,如果是需要做多种染色或组化荧光建议连续切片一次性将需要做的染色片子预留出来备用,防止浪费蜡块组织,默认做防脱切片。